Hola, este es un espacio creado para compartir información con el objetivo de incentivar a la enseñanza-aprendizaje de los alumnos, maestros y toda persona que desee interactuar de manera activa con la Enzimología o materias alternas relacionadas a esta. 

 

INTRODUCCIÓN

La identificación de la actividad enzimática de la catalasa (EC 1.11.1.6) es punto clave en el proceso de investigación guiados a la función celular de los organismos en el campo biológico y bioquímico (Nandi et al., 2019), la misma se encuentra presente en casi todos los organismos aeróbicos efectuando reacciones de descomposición de peróxido de hidrógeno. 

Objetivo: Demostrar la diferencia de la actividad enzimática de la catalasa mediante el uso de medios con diferentes niveles de pH.

Pruebas de Laboratorio: https://youtu.be/Lu05MU2r_Dw?si=wcJonw5ZrQnEj9cS

Tik tok : https://vm.tiktok.com/ZM6bN1Yca/

Materiales y reactivos

• ü  1 cuchillo
• ü  1cuchara
• ü  1 licuadora
• ü  13 vasos de vidrio
• ü  1 recipiente grande de vidrio
• ü  5 jeringas de 10 ml
• ü  1 probeta de 100 o 50 ml
• ü  Guantes
• ü  Bata
• ü  10 papas
• ü  25 g de hígado
• ü  135 ml de agua oxigenada (peróxido de hidrógeno)
• ü  200 ml de vinagre
• 200 ml de jabón líquido 

 METODOLOGÍA

PRÁCTICA 1: Reconocimiento de la actividad catalasa

1.  Registrar volúmenes de los vasos (Tabla 1) implementando el uso de la fórmula de volumen
2. 𝑉 = 𝜋𝑟2𝑥 ℎ.
3. Esterilizar un frasco de vidrio grande y 13 vasos para las consecutivas experimentaciones con ayuda de agua caliente
4. Lavar 10 papas y pelar.
5. Licuar la papa con agua, lo suficiente para que la mezcla se suelte relación 3:1  (3 papas por cada 125 ml de agua) en función a la experimentación.
6. Pasar la mezcla por una media nylon para cernir.
7. Recoger el líquido en el frasco esterilizado.
8. Rotular un vaso (V0) y con ayuda de una jeringa agregar 10 ml de extracto, 5 ml de agua oxigenada y mezclar.
9. Registrar los cambios mostrados durante 2 minutos posteriores.

Nota: el agua debe mantenerse caliente, pero no en constante estado de ebullición debido al riesgo de sufrir quemaduras.

Tabla 1. Volúmenes de los vasos en función a su radio y altura

Código	Radio (cm)	Altura     (cm)	Vol. Vaso (ml)
V1AR1	3.5	8,3	319,42
V1AR2	3.1	9,4	283,79
V1AR3	3.1	9,4	283,79
V2NR1	3	9,4	265,78
V2NR2	3.1	9,4	283,79
V2NR3	3.1	9,4	283,79
V3BR1	3.1	9,4	283,79
V3BR2	3	9,4	265,78
V3BR3	3.3	9,9	338,7

 

PRÁCTICA 2: Efecto del pH sobre la catalasa

 Rotular los vasos en función al ambiente y numero de repetición.

ü  Ambiente acido:    V1AR1 ; V1AR2 ; V1AR3

ü  Ambiente neutro:  V2NR1 ; V2NR2 ; V2NR3

ü  Ambiente básico:   V3BR1 ; V3BR2 ; V3BR3

1.  Agregar en cada vaso 50 ml de extracto de papa.
2.  Agregar 50 ml de vinagre para el ambiente ácido, 50 ml de agua para el ambiente neutro y 50 ml de jabón para el ambiente básico.
3. Mezclar con ayuda de una cuchara sin generar espuma.
4. Añadir 10 ml de agua oxigenada y registrar los cambios por 10 min.

 PRÁTICA 3: Controles

1.       Rotular los vasos en función al control que se probara: C-N, C-A, C-B, C+H.

2.       Añadir 50 ml de agua, vinagre y jabón Independientemente en cada vaso

3.       Añadir 10 ml de agua oxigenado, mezclar y registrar los cambios observados.

4.       Para el control positivo agregar 25 gr de hígado, al mismo 50 ml de agua y 10 ml de agua oxigenada.

5.       Registrar los cambios.

https://youtu.be/5_H9rtxUs3Q?si=2P2MAIOCx-XLNKuv

 

RESULTADOS Y CONCLUSIONES

PRÁTICA 1: Reconocimiento de la actividad catalasa

Tabla 2. Registro de datos del reconocimiento de la actividad catalasa 

Código	Ambiente	t0 (s)	tf (s)	Vol. Vaso (ml)	Vol. Sustrato (ml)	Vol. Efervescencia (ml)
V0	neutro	0.5	120	338.70	15	184.22

 Conclusión: Se afirma la presencia de catalasa en el tejido biológico debido a la gran cantidad de efervescencia producida como muestra de la transformación del peróxido de hidrógeno.

 

PRÁTICA 2: Efecto del pH sobre la catalasa

Tabla 3. Registro de datos: Efecto del pH sobre la catalasa

Repetición	Código	Ambiente	t0 (segundos)	tf (segundos)	Vol. Vaso (ml)	Vol. Sustrato final (ml)	Vol. Efervescencia (ml)	Media efervescencia
1	V1AR1	Ácido	0,5	254	319,42	110	38,48	27,92
2	V1AR2	Ácido	0,5	256	283,79	110	30,19
3	V1AR3	Ácido	0,3	251	283,79	110	15,09
1	V2NR1	Neutro	0,5	600	265,78	107,4	155,5	137,37
2	V2NR2	Neutro	0,4	600	283,79	107,2	144,9
3	V2NR3	Neutro	0,4	600	283,79	107,4	111,7
1	V3BR1	Básico	0,3	430	283,79	109	90,57	60,44
2	V3BR2	Básico	0,4	427	283,79	109	56,54
3	V3BR3	Básico	0,5	429	338,70	109	34,21

 

Conclusión: Se comprueba que la reacción catalítica de la enzima funciona mejor en un ambiente neutro, debido a su grado de sensibilidad a los cambios de pH.

 

PRÁCTICA 3: Controles

Tabla 4. Registro de datos de los controles

Código	Ambiente	Tiempo inicial (segundos)	Tiempo final (segundos)	Vol. Vaso (ml)	Vol. Sustrato final (ml)	Vol. Efervescencia
C-B	Básico	0	0	338,7	60	0
C-N	Neutro	0	0	283,79	60	0
C-A	Ácido	0	0	283,79	60	0
C+H	Neutro	0,1	0,4	338,7	59	136,85

 Conclusión: La evidencia catalítica mostrada por el tejido biológico denota que la enzima catalasa tiene un gran espectro de reacción en medios neutros, además se corrobora que no existe influencia por los solventes utilizados.